龙胆苦苷镇痛抗炎药理作用研究

龙胆苦苷镇痛抗炎药理作用研究

陈雷、王海波、孙晓丽、孙文基

摘要：本文采用小鼠醋酸扭体法和热板法观察龙胆苦苷（gentiopicroside）的镇痛药理作用，采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、蛋清致大鼠足跖肿胀急性炎症模型及大鼠肉芽肿慢性炎症模型，考察龙胆苦苷的抗炎药理作用。龙胆苦苷经皮下注射给药，在小鼠醋酸扭体和热板法实验中，减少了扭体次数，提高了小鼠痛域阈值，呈良好的量效关系。明显减轻了二甲苯致小鼠耳廓肿胀，降低蛋清致大鼠足趾肿胀，抑制了大鼠肉芽肿。结果表明龙胆苦苷对热和化学刺激引起的疼痛反应有明显的镇痛作用，对急、慢性炎症反应均有一定的抑制作用。

关键词：龙胆苦苷；抗炎作用；镇痛作用

秦艽（Gentiana macrophylla Pall.）为龙胆科（Gentianaeeae）龙胆属植物，《本草正义》记载秦艽是“风家润药”，具有“祛风除湿、活血舒筋”的药理作用，常配伍治疗关节疼痛。秦艽中主要成分是龙胆苦苷，其中龙胆苦苷含量最高可达18％。曾有文献报道秦艽碱甲能减轻大鼠的甲醛性关节炎，但秦艽碱甲和龙胆苦苷不属同一类物质，秦艽碱甲为龙胆苦苷氨化所得产物。本文采用皮下注射给药方式，对龙胆苦苷的镇痛、抗炎药理作用进行了研究。

1实验材料

1.1药品及试剂

龙胆苦苷（陕西省生物医药重点实验室，临床研究批件2003L03260，粉针剂，纯度98％以上）；氢化可的松（天津氨基酸公司人民制药厂，990813）；氨苄青霉素（哈药集团制药总厂，A200000820）盐酸吗啡（沈阳第一制药厂）；冰醋酸及其它试剂均为分析纯。

1.2实验动物

昆明种小鼠18-22g由第四军医大学实验动物中心提供，生产合格证号为陕医动字08-013号；Sprague-Dawley（SD）大鼠，体重210-250g，由第四军医大学实验动物中心提供，生产合格证号为陕医动字08-014号。

1.3实验仪器

智能热板仪、计数器、游标卡尺。

2方法和结果

2.1剂量设置

预实验结果表明，100mg／kg为最佳给药剂量，本实验使用50-150mg／kgsc。盐酸吗啡注射液0.1mg／mL，给药量10mL／kgsc。冰醋酸浓度为6.0mg／mL，给药量10mL／kgip。

2.2镇痛实验

2.2.1扭体法

取小鼠100支，雌雄各半，体重18-22g，按性别和体重随机分为5组，生理盐水组、盐酸吗啡组、三个不同剂量给药组，按体重sc给药。给药15min后，各组小鼠均按体重ipHAC，观察15和30min内各组小鼠出现扭体反应的次数，计算该药镇痛百分率。

镇痛百分率（％）=（对照组扭体反应次数一给药组扭体反应次数）／对照组扭体反应次数×100％

实验结果表明三个不同剂量的龙胆苦苷均可以明显减轻小鼠由于腹腔注射冰醋酸引起急性腹膜炎而产生持久的疼痛刺激。

2.2.2热板法

加热板预热10min，调节智能热板仪温度控制器使温度控制在（55±0.5）℃。取18～22g雌性小鼠，每次1只放在热板上，小鼠自放在热板上至出现舔后足所需时间（秒）作为该鼠的痛阈值。凡舔后足时间小于5s或大于30s或跳跃者弃之不用。

将合格的小鼠随机分为5组，生理盐水组、盐酸吗啡组、三个不同剂量给药组，每组20只。重复测其正常痛阈值，取两次正常痛阈平均值，作为该鼠给药前痛阈值。不同剂量给药组小鼠均sc给药，给药后15、30min测小鼠痛阈值。如60s仍无反应，将小鼠取出，以免烫伤，其痛阈值以60s计算。·

实验数据表明，龙胆苦苷可以提高小鼠痛阈值，对热刺激引起的疼痛有一定缓解作用。

2.3抗炎实验

2.3.1对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

小鼠100只，早6各半，体重18-22g，按性别和体重随机分为5组，正常对照组、氢化可的松阳性对照组，龙胆苦苷三个剂量组。每天8.00点分别se不同剂量的龙胆苦苷，等体积的生理盐水或ip20mg/kg的氢化可的松，每天1次，共三次。最后一次给药0.5h后用二甲苯涂于小鼠右耳，耳内外侧各0.01mL，左耳涂以同样的蒸馏水作以对照。0.5h后再涂一遍，再过0.5h处死动物，取左、右耳轮廓，用9号打孔器打取左右耳相同部位耳旁称重，以右耳重量减左耳重之差比左耳重量作为右耳炎症肿胀度。

结果表明：龙胆苦苷大、中剂量组和氢化可的松组能明显减轻二甲苯引起的炎症反应。

2.3.2对蛋清致大鼠足跖肿胀性炎症的保护作用

取SD大鼠50只，雌雄各半，体重210-250g，按性别和体重随机分为5组，包括正常对照组，氢化可的松（15mg／kg）阳性对照组，龙胆苦苷（50、100、150mg／kg）三个剂量给药组。每天8.00点分别sc不同剂量的龙胆苦苷，等体积的生理盐水或ip20mg／kg的氢化可的松，每天1次，共三次。于末次给药lh后用10％的蛋清溶液致炎，每只鼠右足跖sc0.1mL，用游标卡尺测量致炎前及致炎后0.5、1.0、2.0、3.0、4.0h足趾同一部位厚度。

实验结果可见，龙胆苦苷大、中剂量组和氢化可的松组都可抑制蛋清引起的炎症反应，与对照组比较有明显差别。

2.3.3对棉球诱导的大鼠肉芽组织增生的影响

SD大鼠50，雌雄各半，体重210-250g，按性别和体重随机分为5组，包括正常对照组，氢化可的松（15mg／kg）阳性对照组，龙胆苦苷（50、100、150mg／kg）。在戊巴比妥钠麻醉下，将大鼠左右蹊部剪一小口，皮下埋入一无菌棉球[重量为（10±1）mg]，在伤口处各加氨苄青霉素2mg，缝合伤口，整个手术过程为无菌操作。

手术当天开始sc不同剂量的龙胆苦苷，每日一次，氢化可的松组隔日ip1次，连续10d。于末次给药后24h处死动物，取出棉球，剔尽脂肪组织，在60℃烤箱烘干，称重，减去原棉球，即为肉芽肿重量。以对照组和给药组肉芽肿重量差比对照组肉芽肿重量作为抑制率。

实验结果表明，龙胆苦苷大、中、小三个剂量对大鼠棉球肉芽肿呈现依赖性抑制作用。

2.3.4对二甲苯所致去肾上腺小鼠耳廓炎症反应的影响·

昆明种小鼠36只，雌雄各半，体重18-22g，按性别和体重随机分为3组，正常对照组、去肾上腺模型组，龙胆苦苷150mg／kg组。模型组和给药组小鼠在戊巴比妥钠的麻醉下去肾上腺，三天后对照组和去肾上腺模型组so（20mL／kg）生理盐水，给药组8c龙胆苦苷，每天一次，连续4d。末次给药0.5h后用二甲苯涂于小鼠右耳，耳内外侧各0.01mL，左耳涂以同样的蒸馏水作以对照。0.5h后在再涂一遍，再过0.5h处死动物，取左、右耳轮廓，用9号打孔器打取左右耳相同部位耳旁称重，以右耳重量减左耳重之差比左耳重量作为右耳炎症肿胀度。

结果表明，龙胆苦苷对切除了肾上腺的小鼠由二甲苯引起的炎症仍有一定抗炎作用。

3讨论

注射用秦龙苦素，成分为纯度98％以上的龙胆苦苷，已经申请国家中药一类新药（临床批件号2003L03260），主要用于肝炎的治疗，本文主要研究龙胆苦苷新的适应症—关节炎。

秦艽传统用于祛风除湿，活血舒筋，清热利尿，制风湿痹，筋骨拘挛，上述功效多与镇痛和抗炎药理作用相关。李福安等报道了秦艽用于关节炎的治疗，关节炎症状主要表现为疼痛和炎症，龙胆苦苷是秦艽的主要成分，本研究通过皮下注射给药方式证明龙胆苦苷具有明显镇痛、抗炎作用，就为龙胆苦苷治疗关节炎提供了实验基础，龙胆苦苷用于治疗关节炎已经申请了国家专利（NO200610104732.0）。

已有文献报道龙胆苦苷的抗炎作用，采取的是灌胃给药，但这种给药方式生物利用度低，本研究采取皮下注射给药方式，减少了给药量，提高了生物利用度。

扭体实验是化学刺激物注射到小鼠腹腔引起深部的、大面积而较持久的疼痛刺激，是筛选镇痛药最常用的模型之一，龙胆苦苷对冰醋酸引起小鼠的扭体反应具有较好的缓解作用，在实验过程中观察到龙胆苦苷具有一定的镇静作用，注射龙胆苦苷后的小鼠很安静。

在热板实验中，龙胆苦苷延长了小鼠的痛域值，说明龙胆苦苷对由热引起的疼痛也有一定缓解作用，其镇痛作用均呈剂量依赖。在以血管通透性为主要改变的急性炎症模型实验中，龙胆苦苷能显著抑制二甲苯致小鼠耳肿胀及蛋清致大鼠足趾肿胀炎症反应，其抑制作用随剂量的增加而增强。

在以肉芽组织增生为指标的慢性炎症模型实验中，龙胆苦苷能够显著抑制异物所致大鼠炎症的肉芽增生，也表现出一定的量效关系。表明龙胆苦苷对急、慢性炎症反应均有抑制作用，可减轻肿胀和渗出等局部炎症反应。有关龙胆苦苷的镇痛、抗炎机理，以及治疗关节炎的药理作用，我们将进一步做深入研究。

参考文献：略