龙胆苦苷抗炎药理作用研究

龙胆苦苷抗炎药理作用研究

陈长勋、刘占文、孙峥嵘、宋纯清、胡之壁

目的：研究秦艽所含龙胆苦苷的抗炎作用。

方法：分别用二甲苯致小鼠耳肿胀，冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加及小鼠扭体反应，酵母多糖A、角叉菜胶、制霉菌素致大鼠或小鼠足跖肿胀模型，ig给药，观察龙胆苦苷的抗炎作用。结果　龙胆苦苷能减轻二甲苯所致小鼠耳肿胀、冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增加、角叉菜胶、酵母多糖A所致大鼠足跖肿胀，但对制霉菌素所致的炎症模型无明显作用。

结论：秦艽所含龙胆苦苷具有一定的抗炎作用，其机制涉及对多种炎症介质的抑制。抗炎作用能部分代表秦艽生药的传统功效。

关键词：秦艽、龙胆苦苷、抗炎

秦艽是龙胆科龙胆属草本植物秦艽Gentiana macrophylla Pall.，麻花秦艽Gentiana straminea Maxim.，粗茎秦艽Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk或小秦艽Gentiana dahurica Fisch.的干燥根，为重要传统中药，具有祛风湿、止痹痛、清湿热的功效，临床用于风湿痹痛、筋脉拘挛、骨节烦痛、日晡潮热、小儿疳积发热等症。

秦艽中的化学成分曾有不同报道。早期认为其主要含生物碱类成分，但近年的化学分析结果表明，秦艽乙醇浸液中含龙胆苦苷（gentiopi-croside），对秦艽中确有的成分龙胆苦苷，目前国内尚无较系统的口服抗炎药理研究报道。故本研究针对龙胆苦苷进行抗炎方面的实验。

1　材料

1.1　供试品：

龙胆苦苷粉末，从秦艽生药中提得，含量>95%，由上海中医药大学中药研究所生物工程研究室提供，实验前用蒸馏水配成所需浓度。

1.2　药品与试剂：

消炎痛（粉剂），上海第十七制药厂产品，实验前用蒸馏水配成1mg/mL。酵母多糖A（zymosan A），Sigma Chemical Co.产品，批号106H1088，实验前用生理盐水配成5mg/mL。角叉菜胶（carrageenan），瑞士Fluka公司产品，批号CH-9470，实验前用生理盐水配成10mg/mL。制霉菌素（nystatin），Sigma Chemical Co.产品，批号56H0470，实验前用生理盐水配成6mg/mL。

1.3　动物：

昆明种小鼠，清洁级，动物合格证号：医动字第0224-03号；Wistar大鼠，清洁级，动物合格证号：医动字第02-24-04号，均由上海中医药大学实验动物中心提供。SD大鼠，清洁级动物，上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供。

2　方法和结果

2.1　对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响：

小鼠72只，随机分为4组，对照组ig生理盐水10mL/kg，龙胆苦苷组分别ig龙胆苦苷0.3，0.6g/kg，消炎痛组ig消炎痛0.015g/kg，每天1次，连续4d，于末次给药后1.5h，用二甲苯30μL均匀涂于小鼠右耳两侧，30min后剪下两耳，用9mm打孔器于两耳相同部位取下两耳片，置于精密天平上称重，计算肿胀度（肿胀度=右耳片重-左耳片重）。

结果见表1。

结果表明，龙胆苦苷0.6g/kg能明显对抗二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀。

2.2　对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀的影响：

取100～150g雄性SD大鼠40只，随机分为4组，对照组及龙胆苦苷组给药方法同2.1项，泼尼松组ig泼尼松0.015g/kg，每天1次，连续4d。于末次给药后1.5h在大鼠右后足跖sc1%角叉菜胶每只0.1mL，并于注射前及注射后1，2，4，6，8h测量足跖容积，计算肿胀百分率。

结果见表2。

结果表明，龙胆苦苷能够明显抑制角叉菜胶所致的大鼠后足跖肿胀反应，加速炎症反应的消褪。肿胀百分率=（注射后容积-注射前容积）/注射前容积×100%（下同）

2.3　对冰醋酸所致腹腔毛细血管通透性增加的影响：

取（20±2）g昆明种小鼠60只，雌雄各半，随机分为4组，分组及给药方法同2.2项，连续给药7d，于末次给药后1.5h尾iv0.5%伊文思蓝生理盐水溶液0.1mL/10g，10min后ip0.7%冰醋酸0.1mL/10g，20min后脱颈椎处死动物，每只ip5mL生理盐水，并轻揉腹部3min，然后从腹腔内吸出腹腔冲洗液3mL左右（冲洗液如被血液污染，则弃去不用），1000r/min离心5min，用754分光光度计于590nm波长处比色，测定吸光度（A）值。

结果见表3。

结果表明，龙胆苦苷能明显抑制冰醋酸所致腹腔毛细血管通透性增加。

2.4　对冰醋酸所致小鼠扭体反应的影响：

取（20±2）g昆明种小鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，对照组及龙胆苦苷组给药方法同2.1项，阿司匹林组ig阿司匹林0.02g/kg，每天1次，连续给药5d，于末次给药后1.5hip0.7%冰醋酸0.1mL/10g，观察小鼠的扭体反应，并计算30min内小鼠的扭体次数。

结果见表4。

结果表明，龙胆苦苷能明显抑制冰醋酸所致小鼠扭体反应，减少扭体次数。2.5　对酵母多糖A所致大鼠足跖炎症的影响：取Wistar大鼠40只，雄性，（100±20）g，随机分为4组，对照组及龙胆苦苷组给药方法同2.1项，消炎痛组ig消炎痛，10mg/kg，连续给药3d，末次给药后1h，分别于大鼠右后足跖sc5mg/mL酵母多糖A液每只0.1mL，用足跖容积法测量致炎前和致炎后1，2，3，4，6h大鼠的右后足跖体积，计算足跖肿胀百分率。

结果见表5。

实验结果表明，秦艽中的龙胆苦苷能对抗酵母多糖A所致大鼠足跖肿胀，以龙胆苦苷大剂量效果最为显著。

2.6　对制霉菌素致小鼠足跖炎症的影响：

参照文献，取昆明种小鼠52只，雄性，18～22g，随机分为4组。各组给药方法同2.5项，连续给药2d，末次给药后1h，每鼠右后足sc6mg/mL制霉菌素溶液每只0.05mL。3h后处死小鼠，在踝关节处剪下左右后足，立即称重，计算各鼠后足肿胀百分率。

结果见表6。

实验结果表明，龙胆苦苷对制霉菌素所致大鼠足跖肿胀并无明显抑制作用。

肿胀百分率=（右后足重-左后足重）/左后足重×100%

3　讨论

中医临床将秦艽用于祛风湿、舒筋络、清虚热、利湿褪黄。抗炎是与祛风通络功效较为密切的药理作用。已有报道，秦艽的水提取物及醇提取物对蛋清、角叉菜胶所致大鼠脚爪水肿，巴豆油所致小鼠耳肿胀具有一定抑制作用。

本研究采用口服给药方式，对秦艽所含龙胆苦苷的抗炎作用进行了研究，以探明龙胆苦苷是否能代表或部分代表秦艽生药的这一药理作用。

本研究结果表明，秦艽中的龙胆苦苷能抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀、醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增加，对抗酵母多糖A、角叉菜胶所致的大鼠足跖肿胀，并有一定的剂量依赖关系，但对制霉菌素所致的炎症模型无明显的改善作用。

本实验表明龙胆苦苷对炎症早期渗出具有一定的抑制作用。酵母多糖A能诱导多种炎症介质释放，包括组胺、5-HT、白三烯（LTB4）、前列腺素（PGs）、血栓素、血小板活化因子、氧自由基等。

文献报道，消炎痛对酵母多糖介导的炎症反应抑制作用并不很强。本实验所用消炎痛的剂量约为临床的等效量，作用亦并不很强，与文献报道基本相符。而大剂量龙胆苦苷抑制酵母多糖的炎症反应，其作用较上述剂量的消炎痛略佳。

本实验结果还显示，与消炎痛相似，龙胆苦苷亦有一定的抑制角叉菜胶诱导的炎症反应作用。制霉菌素主要为破坏溶酶体膜的稳定性而致炎。龙胆苦苷对制霉菌素所致炎症反应无明显的抑制作用，说明其对溶酶体膜无明显的保护作用。

综上所述，龙胆苦苷具有一定的抗炎作用，可视为秦艽抗炎的主要有效成分。其作用机制与消炎痛并不完全相同，可能涉及对多种炎症介质的抑制，但并无明显的稳定溶酶体膜作用。

参考文献：略